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粒系集落刺激因子对健康供者单核细胞及 N K细胞表型的影响

来源:中国造血干细胞捐献者资料库北京管理中心 时间:2015-11-11

金辉1 徐娟2△ 宋伟2 苏力2 冀冰心2 李涛1 张晨伟2 谢宝树1 李福兴1 王蕊1
(1.中国造血干细胞捐献者资料库北京管理中心 ,北京 100088 ,2.首都医科大学宣武医院 血液科)

摘要:

目的  探讨粒系集落刺激因子(G-CSF)作为造血干细胞动员剂对健康供者外周血单核细胞及NK细胞表型的影响。

方法   对25名自愿捐献的健康供者应用G-CSF作造血干细胞动员 ,分别于动员前、动员后(干细胞采集当日)、干细胞采集后7d及采集后1个月收集健康供者的外周血标本,用流式细胞仪检测细胞数量及细胞免疫表型。

结果  动员后外周血单核细胞和NK细胞的绝对数量分别动员前增高4.96和2.02倍 ,采集后7d二者都恢复到动员前水平。动员前后单核细胞表面CD14的抗原表达的差异无统计学意义(P>0.05) ,但HLA-DR抗原表达强度明显减弱(P<0.05) ,于采集后7d恢复到动员前水平;动员前后NK细胞表面CD16抗原表达差异无统计学意义(P>0.05) 。

结论  G-CSF作为造血干细胞动员剂可以使健康供者外周血的单核细胞和NK细胞数量在短期内增加;使单核细胞表面HLA-DR抗原表达在短期内减弱 ,但不影响单核细胞表面CD14抗原及NK细胞表面CD16抗原的表达。

关键词: G-CSF;健康供者;单核细胞;NK细胞

中图分类号 :R392112  R45717     文献标识码 :A    文章编号:10042549X(2007) 0420269204

Effect of granulocyte colony stimulating factor on the phenotypes of monocytes and nature killer cells in healthy donor 

J I N Hui1, XU J uan2, SON G Wei2, et al . 1. The Data B ank of Chinese Hematopoiet ic S tem Cel l Donors Bei j ing Management Center , Bei j ing 100088 ;2. The Department of Hematology , X uan Wu Hos pi tal , Ca pi tal Uni versi t y of Medical S cience

Abstract:

Objective To study the effect of administ ration of granulocyte colony2stimulating factor ( G-CSF) on the phenotype of monocytes and natural killer (NK) cells in healthy individuals during mobilization of hematopoietic stem cells.

Methods Peripheral blood samples from 25 healthy donors were taken prior to , after mobilization (the day of stem cell collection) by G-CSF , on day 7 and 1 month af ter the collection of stem cells. Flow cytometry was used to assay the amount and intensity of antigen expression on monocytes and NK cells.

Results After mobilization , the absolute count of monocytes and NK cells increased by 4.96 and 2.02 folds , respectively, but returned to pre-mo-bilization levels on the day 7 af ter stem cell collection.The antigen expression of HLA-DR on monocytes decreased (P<0.05) and returned to pre-mobilization levels 7 days later. The CD14 expression on monocytes and CD16 on NK cells showed no significant change af ter mobilization.

Conclusion  G-CSF could induce increase of monocytes and NK cells as well as decrease of HLA-DR expression of monocytes in a short term af ter mobilization. No significant change of antigen expression of CD14 on monocytes and CD16 on NK cells were found.

Key words : Healthy donor;Monocyte;NK cell;Antigen expression

   随着造血干细胞移植技术的进步及造血干细胞捐献资料库的扩大,无关供者造血干细胞移植术已在国内外广泛开展。因外周造血干细胞移植具有采集方便及造血植入快的特点[1,2],目前国内多采用外周血造血干细胞捐献的方法。粒系集落刺激因子(G-CSF)作为造血干细胞动员剂具有良好的动员效果 ,使定居在骨髓的造血干细胞迁移到外周血;与骨髓造血干细胞移植相比 ,虽然外周血移植物中增加了免疫细胞的数量 ,但并未导致急性移植物抗宿主病( GV HD)的发生率明显增加[3],说明 G-CSF 具有使免疫细胞免疫应答能力下降的作用[4]。但这种变化究竟对健康供者的免疫参与细胞有无影响 ,是全社会非常关注的问题。单核细胞和N K细胞是机体重要的免疫细胞 ,单核细胞的主要功能是参与对外来物质的吞噬、 消化并将抗原递呈给参与免疫应答反应的T淋巴细胞[5],而NK细胞具有抗体依赖的细胞介导细胞毒作用(ADCC) ,起到免疫调节、 识别非己和外来入侵微生物的作用[6]。我们动态观察了G-CSF 对健康供者单核细胞和NK细胞的数量及抗原表达的影响 ,现报告如下。

1 材料与方法

1.1  样本来源  2005 年 12 月 — 2007 年 6 月 ,中国造血干细胞捐献者资料库北京管理中心捐献造血干细胞的健康供者 25 人,其中男 17 名 ,女 8 名 ,中位年龄 28 岁(14 — 56 岁) 。全部供者常规体检未发现异常 ,并签署知情同意书。

1.2  造血干细胞动员  惠尔血( rh G-CSF, Kirin 公司) 5μg/ kg·d ,皮下注射 ,连续注射 4 —5d。

1.3  标本采集  分别于G-CSF动员前、动员后(造血干细胞采集当日)、采集后 7d 及采集后 1 个月收集供者外周血标本2ml/人(份) 。

1.4  流式细胞仪分析  采用 FACScalibur 流式细胞仪(美国BD 公司 ,发射激光为氩离子激光器 ,功率为 15Mw ,激发光波长为 488nm)检测单核细胞、NK细胞数量及CD14、HLA-DR 与CD16/CD56表达水平;采用 Cell Quest 软件分析 ,其中 FITC、PE、PE2CY5 荧光分别设在 FL21、FL22及FL23荧光通道上 ,测定前以标准校正荧光微球校正仪器 ,每测定管收集10000个细胞。CD14-PerCP/SSC(sidescatter ,侧向散射光)设门确定单核细胞群;试剂为Multiset 试剂盒(美国BD 公司) 。

1.5  观察指标

1.5.1  细胞绝对数量  

1)单核细胞:流式细胞仪收集 10000 个白细胞 ,以 CD14+单核细胞群的百分数 ,与当天血细胞计数仪检测的白细胞总数换算出单核细胞的绝对数量;

2)NK细胞:Multiset 软件直接获取、分析及打印结果。

1.5.2  相对荧光强度(RFI)  采用美国2加拿大一致推荐的标准[7]

1.6  统计学分析  在 SPSS 11.5 统计软件支持下对上述观察指标作配对t检验,以P<0.05 作为显著性检验的标准。&l

 

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